Products
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR fitaovana fitiliana ho an'ny 2019-nCoV
Fampiasana andrasana
Ity kitapo ity dia ampiasaina amin'ny fitiliana qualitative ny coronavirus vaovao (2019-nCoV) amin'ny fampiasana swab tenda, swab nasopharyngeal, fluid lavage bronchoalveolar, sputum. porofo momba ny aretina sy ny fitsaboana amin'ny klinika.Ny famakafakana feno momba ny toe-javatra dia aroso miaraka amin'ny fisehoan'ny klinika amin'ny marary sy ny fitsapana laboratoara hafa.
Fitsipika fanaraha-maso
Ny kitapo dia mifototra amin'ny teknolojia RT-PCR dingana iray.Raha ny marina, ny 2019 coronavirus vaovao (2019-nCoV) ORF1ab sy ny fototarazo N no nofantenana ho faritra kendrena amplification.Ny primer manokana sy ny probe fluorescent (ny probe gene N dia misy marika FAM ary ny probe ORF1ab dia misy marika HEX) dia natao hamantarana ny RNA coronavirus 2019 vaovao amin'ny santionany.Ny kitapo ihany koa dia misy rafitra fanaraha-maso anatiny endogenous (fanadihadiana fototarazo fanaraha-maso anatiny misy marika CY5) hanaraha-maso ny fizotran'ny fanangonana santionany, fanamafisam-peo RNA sy PCR, ka hampihena ny vokatra ratsy diso.
singa fototra
| singa | BOKY FAHA-(48T/K） |
| RT-PCR vahaolana | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture（ORF1ab,N Gene,RnaseP Gene） | 864µl |
| Fanaraha-maso ratsy | 1500µl |
| nCOV Mifanohitra tsara (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
Reagents manokana: fitrandrahana RNA na reagents fanadiovana.Fanaraha-maso ratsy/positif: Ny fanaraha-maso tsara dia ny ARN misy ny sombintsombiny kendrena, raha ny fanaraha-maso ratsy kosa dia rano tsy misy asidra nokleary.Mandritra ny fampiasana dia tokony handray anjara amin'ny fitrandrahana izy ireo ary tokony hoheverina ho areti-mifindra.Tokony hokarakaraina sy ariana araka ny fepetra mifandraika amin'izany.
Ny fototarazo anatiny dia ny fototarazo RnaseP olombelona.
Fepetra fitahirizana sy daty lany daty
-20 ± 5 ℃, misoroka ny hatsiaka miverimberina sy ny fanalefahana mihoatra ny in-5, manan-kery mandritra ny 6 volana.
Fitaovana azo ampiharina
Miaraka amin'ny FAM / HEX / CY5 sy fitaovana PCR fluorescent maro hafa.
Fitakiana santionany
1. Karazana santionany azo ampiharina: tenda swabs, nasopharyngeal swab, bronchoalveolar lavage ranon-javatra, sputum.
2. Fanangonana santionany (teknika aseptika)
Fasana pharyngeal: Kosory miaraka amin'ny swab roa ny tonsils sy ny rindrin'ny pharyngeal aoriana, ary atsobohy ao anaty fantsona misy ny vahaolana ny santionany ny lohany.
Sputum: Rehefa avy nikohaka lalina ny marary, dia angoniny ao anaty tavoahangy misy ny vahaolana azo alaina ny sputum mikohaka ao anaty tavoahangy misy satroka visy;bronchoalveolar lavage fluid: Sampling ataon'ny mpitsabo.3. Fitahirizana sy fitaterana santionany
Ny santionany amin'ny fitokana-monina otrik'aretina sy ny fitiliana RNA dia tokony hotsapaina haingana araka izay azo atao.Ny santionany izay hita ao anatin'ny 24 ora dia azo tehirizina amin'ny 4 ℃;ireo izay tsy hita ao anatin'ny 24
ora tokony ho voatahiry amin'ny -70 ℃ na ambany (raha tsy misy fitehirizana ny -70 ℃, dia tokony ho
voatahiry vonjimaika ao amin'ny vata fampangatsiahana -20 ℃).Ny santionany dia tokony hialana amin'ny fangatsiahana sy ny fanalefahana miverimberina mandritra ny fitaterana.Tokony halefa haingana any amin'ny laboratoara ny santionany aorian'ny fanangonana.Raha toa ka mila entina lavitra ny santionany, dia aroso ny fitehirizana ranomandry maina.
Fomba fitsapana
1 Fanodinana santionany sy fitrandrahana RNA (faritra fanodinana santionany)
Amporisihina ny maka 200μl ny santionany ranoka ho an'ny fitrandrahana ARN.Ho an'ny dingana fitrandrahana mifandraika amin'izany dia jereo ny torolàlana momba ny kitapo fitrandrahana RNA ara-barotra.Na ny ratsy na ny ratsy
Ny fanaraha-maso amin'ity kitapo ity dia nandray anjara tamin'ny fitrandrahana.
2 Fiomanana PCR reagent (faritra fanomanana reagent)
2.1 Esory ny singa rehetra ao amin'ny kitapo ary alaivo ary afangaro amin'ny mari-pana.Centrifuge amin'ny 8,000 rpm mandritra ny segondra vitsy alohan'ny fampiasana;kajy ny habetsaky ny reagents ilaina, ary ny rafitra fanehoan-kevitra dia voaomana araka ny aseho amin'ny tabilao manaraka:
| singa | N serivisy (rafitra 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR vahaolana | 2 µl × N |
| *N = isan'ny santionany notsapaina + 1 (fifehezana ratsy) + 1 (nCOVfanaraha-maso tsara) | |
2.2 Rehefa avy nampifangaro tsara ireo singa, centrifuge mandritra ny fotoana fohy mba hamela ny ranon-javatra rehetra eo amin'ny rindrin'ny fantsona latsaka any amin'ny farany ambany ny fantsona, ary avy eo aliquot ny 20 µl rafitra fanamafisam-peo ao amin'ny PCR fantsona.
3 Sampling (faritra fanomanana santionany)
Ampio 5μl ny fanaraha-maso ratsy sy tsara aorian'ny fitrandrahana.Ny ARN amin'ny santionany hotsapaina dia ampidirina amin'ny fantsom-pandrefesana PCR.
Asio mafy ny fantsona ary atsipazo amin'ny 8.000 rpm mandritra ny segondra vitsy alohan'ny hamindrana azy any amin'ny faritra misy ny fanamafisam-peo.
Fanamafisana PCR 4 (faritra fanamafisam-peo)
4.1 Apetraho ao amin'ny sela santionan'ny fitaovana ny fantsona fanehoan-kevitra, ary apetraho toy izao manaraka izao ny masontsivana:
| DINGANA | tsingerin'ny isa | hafanana(°C) | Time | famoriam-bolatoerana |
| Reversefandikana | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pre-denaturationn | 1 | 95 | 1min | - |
| tsingerin'ny | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30 taona | fanangonana angona |
Fantenana fantsom-pandrefesana fitaovana: Safidio ny fantsona FAM, HEX, CY5 ho an'ny famantarana fluorescence.Ho an'ny fanondroana fluorescent TSY MISY, aza misafidy ROX.
5 Famakafakana vokatra (jereo azafady ny torolalana andrana amin'ny fitaovana tsirairay amin'ny fametrahana)
Aorian'ny fanehoan-kevitra, tehirizo ny valiny.Aorian'ny famakafakana, amboary ny sandan'ny fanombohana, ny fiafaran'ny sanda ary ny sandan'ny tokonam-baravarana araka ny sary (ny mpampiasa dia afaka manitsy araka ny zava-misy marina, ny sanda fanombohana dia azo apetraka amin'ny 3 ~ 15, ny sanda farany dia azo apetraka amin'ny 5~20, fanitsiana) ao amin'ny grafika logarithmic Eo amin'ny tokonam-baravarankely, ny tsipika tokonam-baravarana dia ao amin'ny dingana logaritma, ary ny curve amplification ny fanaraha-maso ratsy dia tsipika mahitsy na eo ambanin'ny tsipika tokonam-baravarana).
6 Fanaraha-maso quauty（Ampidirina ao anatin'ny fitsapana ny fanaraha-maso ny fomba fiasa） Fanaraha-maso ratsy: Tsy misy curve fanamafisam-peo mazava ho an'ny FAM, HEX, CY5 detection channelsn
Fanaraha-maso tsara COV: curve fanamafisam-peo mazava amin'ny fantsom-pahitalavitra FAM sy HEX, Ct value≤32, fa tsy misy curve amplification ny fantsona CY5;
Ireo fepetra voalaza etsy ambony ireo dia tsy maintsy fenoina miaraka amin'ny fanandramana mitovy;raha tsy izany dia tsy manan-kery ny fanandramana ary mila averina.
7 Famaritana ny vokatra.
7.1 Raha tsy misy curve fanamafisam-peo na sanda Ct> 40 ao amin'ny fantsona FAM sy HEX amin'ny santionany fitsapana, ary misy curve fanamafisam-peo ao amin'ny fantsona CY5, dia azo tsaraina fa tsy misy coronavirus vaovao 2019 (2019-nCoV) RNA ao amin'ny santionany;
.2 Raha toa ny santionan'ny fitsapana manana fiolahana fanamafisam-peo miharihary ao amin'ny fantsona FAM sy HEX, ary ny sandan'ny Ct dia ≤40, dia azo tsaraina fa ny santionany dia tsara ho an'ny coronavirus vaovao 2019 (2019-nCoV).
7.3 Raha toa ny santionan'ny fitsapana manana curve fanamafisam-peo mazava afa-tsy amin'ny fantsona iray an'ny FAM na HEX, ary ny sandan'ny Ct dia ≤40, ary tsy misy curve fanamafisam-peo amin'ny fantsona hafa, dia mila averina averina ny valiny.Raha tsy miova ny valim-panadinana indray, dia azo tsaraina ho tsara ho an'ny vaovao ilay santionany
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Raha ratsy ny valim-panadinana dia azo tsaraina fa ratsy ilay santionany amin'ny coronavirus vaovao 2019 (2019-nCoV).
Sanda mitsara tsara
Ny fomba curve ROC dia ampiasaina hamaritana ny sandan'ny reference CT amin'ny kitapo ary ny sanda fanondroana fanaraha-maso anatiny dia 40.
Fandikana ny valin'ny fitsapana
1. Ny fanandramana tsirairay dia tokony hotsapaina amin'ny fanaraha-maso ratsy sy tsara.Ny valin'ny fitsapana dia tsy azo faritana raha tsy mahafeno ny fepetra takian'ny fanaraha-maso ny kalitao
2. Rehefa tsara ny fantsona fandrefesana FAM sy HEX, dia mety ho ratsy ny vokatra avy amin'ny fantsona CY5 (fantsona fanaraha-maso anatiny) noho ny fifaninanana rafitra.
3. Rehefa ratsy ny valin'ny fanaraha-maso anatiny, raha ratsy koa ny fantsona fandrefesana FAM sy HEX, dia midika izany fa kilemaina ny rafitra na tsy mety ny fandidiana, tsy mety ny fitsapana.Noho izany, mila averina averina ny santionany.
